Технология in vitro. Размножение растений in vitro в домашних условиях

Купить саженцы различных культур для садоводов сейчас не составляет никакого труда. Их можно заказать в Интернете и увидеть на местных рынках. Ассортимент и диапазон цен очень широк, например, саженцы малины и ежевики можно найти по 5-7 грн, клубнику – по 2 грн, а за супер - новинки придется выложить несколько сотен гривен. Думаю, многие садоводы, заказывая посадочный материал, оставались не довольными их качеством. Чтобы конкурировать и снизить цену на саженцы производители не редко упрощают технологию, которую необходимо выдерживать на маточниках. В результате саженцы получаются слабые и болезненные.

Но садоводам и фермерам нужен качественный и здоровый посадочный материал за приемлемую цену. Выходом из ситуации может стать микроклональное размножение растений (in vitro , дословно в стекле) – новая технология вегетативного размножения растений, позволяющая в ограниченные сроки получить большое количество идентичных копий (клонов) исходного растения. Кроме непосредственно размножения, технология дает возможность избавиться от подавляющего большинства инфекций (вирусов, бактерий, грибов и т.д.), при условии соблюдения технологических приемов. За счет этого, растения после in vitro размножения обладают значительно лучшими характеристиками (сила роста, продуктивность, устойчивость к болезням и т.д.) по сравнению с исходными растениями. Такой посадочный материал относят к разряду супер-супер элиты.

Ответить на наши вопросы на тему «in vitro» любезно согласился Алексей Викторович - кандидат сельскохозяйственных наук с опытом работы с культурой тканей растений (микроклональное размножение).

«Biznesselo»: Алексей Викторович, расскажите какие растения можно размножать ин-витро?

Во-первых, начнем с того, что немного развеем мифы и заблуждения. Технология микроклонального размножения растений (англ., in vitro microclonal plant propagation) – очень старый и широко используемый во все цивилизованном мире метод быстрого размножения растительного материала. Первые протоколы сред для размножения были описаны физиологами растений Тошио Мурасиге и Фольке К. Скугом еще в далеком 1962 году. В настоящее время практически весь посадочный материал заграницей получают при использовании в той или иной мере метода in vitro.

Во-вторых, по своей сути ничего особо мистического и загадочного в методе нет, за исключением самого громкого названия. Это просто еще один хорошо модифицированный способ обычного вегетативного размножения, который позволяет в ограниченное время получить свободный от патогенов посадочный материал в больших или очень больших количествах.

Лаконично отвечая на Ваш вопрос – любые, с определенными ограничениями, связанными с особенностями роста тех или иных растений. Как правило, чем лучше растения размножаются в природе, тем выше будет коэффициент размножения и в культуре in vitro.

«Biznesselo»: Какие основные этапы микроклонального размножения?

● введение в асептическую культуру (стерильные условия);

● непосредственно размножение;

● адаптация (выведение из культуры in vitro) растений к условиям in vivo (обычным)

«Biznesselo»: Расскажите подробнее, как удается избавляться от бактерий, грибов и главное вирусов?

Во-первых, для введения в культуру in vitro используют точки роста растений, условно говоря, внутреннюю часть почки (апикальные меристемы), которые само растения защищает от патогенов. Во-вторых, на начальном этапе части растений (экспланты) обрабатывают веществами убивающие большинство патогенов (соли сулемы, перекись водорода, спирт и т.д.). И, наконец, в-третьих, во время культивирования и пересадки растений удаляются больные и зараженные бактериями и грибами.

Немного сложнее обстоят дела с вирусами. В этом случае или берут заранее здоровые от вирусов растения (проводят диагностику наличия вирусов методами молекулярной биологии, как при заболеваниях человека) или избавляются от вирусов методом термической терапии.

«Biznesselo»: Какая примерно себестоимость саженца in vitro (например, малина, земляника, ежевика) сравнительно с посадочным материалом, который был размножен традиционным способом?

Конечная цена определяется в основном ценами на энергоресурсы, стоимостью реактивов (химические соли и фитогормоны), поскольку растения длительное время “живут” в условиях искусственного освещения на специальных твердых субстратах (агаризированной среде). В среднем, стоимость одного in vitro саженца превышает стоимость обычного в 1,5 – 2 раза. При этом следует учитывать количество размножаемых растений, чем больше оборот, тем меньше себестоимость.

«Biznesselo»: Можно ли применять технологию ин-витро для получения новых сортов и видов растений?

Вопрос очень интересный. Одновременно и простой и сложный. Связано это со сложностью самого определения сорта. Как реально работающий в этой области молекулярный генетик могу однозначно сказать, что описательная морфология как главный критерий при регистрации того или иного сорта растений – это очередная кормушка для нечестных людей. Вы, наверное, удивитесь, но очень многие сорта это результат воровства друг у друга или вывезенные в кармане из-за границы растения, которые проявляют разные морфологические характеристики в других климатических зонах (в пределах фенотипической изменчивости). Любые попытки ввести в госреестр элементы генетического контроля происхождения сортов, на сегодняшний день, обречены по понятным нам всем причинам.

Так вот, культура in vitro позволяет отобрать из большого числа клонов устойчивые к химическим соединениям, абиотическим факторам и т.д. растения. Будут ли эти клоны новыми сортами вопрос скорее юридический, чем биологический.

Другое дело, что как составной элемент целого ряда направлений клеточной биологии, культура in vitro помогает получать новые виды, ранее в природе не существовавшие. Но это уже совсем другой разговор.

«Biznesselo»: Возможны ли мутации при микроклональном размножении?

Теоретически – да. Но как показывает мой опыт, при соблюдении элементарной этики работы доля растений с измененным фенотипом, статистически ничтожна.

«Biznesselo»: Какая приживаемость у in vitro растений?

Все in vitro саженцы – растения с закрытой корневой системой. Приживаемость такого посадочного материала – максимально возможная.

«Biznesselo»: Правда, что растения размножены микроклональным способом, более устойчивы к болезням и неблагоприятным погодным условиям?

Строго говоря, к абиотическим факторам – нет. С другой стороны любая устойчивость имеет полигенный характер, как проявления, так и наследования (работают одновременно много генов и их взаимодействия определяются ответом на конкретные условия, т.е. не всегда линейно и последовательно). Другими словами, если Вы не подкормили на зиму растения и не укрыли незимостойкие, никакие технологии не спасут от вымерзания. Но, если Вы все необходимые процедуры выполнили, то устойчивость оздоровленных растений будет выше. При этом никаких статистически достоверных подтверждений такой устойчивости я привести не могу.

С патогенами ситуация более понятна: однозначно in vitro саженцы имеют конкурентные преимущества по сравнению с обычными. Они изначально здоровы, поэтому развиваются и плодоносят быстрее. А уже взрослые растения (в зависимости от сортовых особенностей конечно) сами могут за себя “постоять”.

«Biznesselo»: Мы планируем заложить маточник малины и земляники. Какой класс растений вы бы посоветовали использовать?

Здоровые и районированные. Как мне кажется, работы по закладке маточника нужно начинать не с растений, а анализа почвы и климатических условий. При этом любые агротехнические приемы способны повышать урожайность. Например, для всех нам известного картофеля, удаление соцветий в стадии бутонизации способно повышать конечный валовый выход продукции до 10 %. То же самое относится и к окучиванию, фумигации, корневым подкормкам и т.д. Я уже не говорю про предварительное выращивание сидератов как способа обогащения почвы и борьбы с сорняками.

Поэтому, для раскрытия генетического потенциала растения нужно создать оптимальные условия. Без серьезной предварительной работы выбор класса саженцов не имеет значения.

Размножение растений в культурах ин-витро (микроразмножение) означает способ размножения в искусственных, асептических условиях (в стекле). Представления микроразмножения является теория заложенная, когда каждая клетка растения покрытосеменных скрывает переданные через ядро и цитоплазму свойства, которые в определенных условиях делает возможным восстановление целого организма, отвечающему целому материнскому растению. Размножение ин-витро растений садовых, древесных, проходит примерно как растений зеленых, однако достижение свойств размножение является более сложным. В процессе розмнажения можно выделить четыре этапа.

Этап первый и второй. Оздоровление и размножение.

Материалом для размножения, используются растения свободные от болезней, зачастую с помощью термотерапии, после зимнего отдыха берут верхушечный побег растения. Стерилизацию поверхности проводят с помощью смеси из (50% алкоголя и 0,1% хлорки (хлорид ртути)). Для размножения используют верхушечный побег 0,3-0,8 мм, для смеси чаще всего используют работы Мурашига и Кога, с добавлением цитокинина BAP (бензиламинопурина), стимулятора роста и образователя новых побегов. В первом этапе растения содержаться 3-4 недели, создаются несколько дополнительных побегов. Состав Мурашига и Кога таков: (в мг/л)

Субтракция пробуждает рост и образование боковых побегов. Для получения хороших приростов размножения нужно использовать хорошие термично-освещенные условия. Интенсивность осветления должна быть около 1000 люксов (1000 люмий на квадратный метр), а температура воздуха от 21 до 25 градусов Цельсия . Температура выше 30 гр приводит к быстому старению материала и уменьшению продуктивности.

Этап второй. Укоренение.

Для укоренения в пробирках используют молодое растения с хорошо образовавшимися листьями, длиной около 2 см. Для укоренения используют стимуляторы корнеобразования на основе ауксина.

Типы использования различных ауксинов (NAA, IAA или IBA) считается самым лучшим раствором с содержанием от 0,5 до 2 мг на литр раствора. Перебор укоренителя вызывает образование калиуса и затруднение образование корней. Хорошему укоренению растений способствует интенсивность света и уменьшение минеральных солей, добавление витаминов, B1, B2, B6, кислоты никотиновой и аскорбиновой.

Этап четвертый. Адаптация растений из пробирки в теплицу.

Размножение растений в ин-витро, есть в практике несколько десятков лет. Большое значение в этом способе является быстрое размножение растений за короткое время, а также выращивание их без вирусов. С одной почки растения можно вырастить несколько тысяч растений.

Мы создали собственную лабораторию и освоили технологию производства элитного посадочного материала голубики высокорослой , ежевики , жимолости съедобной , малины, брусники.

Культура in vitro – выращивание клеток, тканей, органов на искусственной питательной среде в абсолютно стерильных условиях при контролируемых физических факторах (свет, температура, влажность, фотопериодичность).

Микроклональное размножение – разновидность вегетативного размножения растений в культуре in vitro. Оно освоено на явлении тотипотентности (способность нести и восстанавливать генетическую информацию растений).

Преимущества микроклонального размножения

• Метод обеспечивает высокий коэффициент размножения, что дает возможность быстро внедрить в производство новые сорта растений.
• В процессе размножения обеспечивается оздоровление посадочного материала.
• Требуется небольшое количество стартового материала.
• Выполнение работ осуществляется в лабораторных условиях и не зависит от факторов внешней среды.
• Возможность размножения растений, трудно размножаемых в естественных условиях.

Исходным материалом для введения растений в культуру обычно служат элитные растения, типичные для сорта и без признаков инфекции.

Этапы микроклонального размножения

• I. Стерилизация эксплантов (любая часть растения, культивируемая в условиях in vitro). Введение в культуру in vitro. На этом этапе важно обеспечить успешное помещение экспланта на питательную среду, наблюдая тем самым растяжение тканей путем дифференциации клеток растения.
• II. Собственно размножение. Целью этапа является увеличение числа побегов в культуре in vitro. Размножение на этом этапе является важным моментом. Индуцируются меристематические центры, которые развиваются в почке или побеге.
• III. Укоренение и адаптация в нестерильных условиях. На этом этапе удлиняются побеги, индуцируются корни, затем осуществляется перенос в тепличные условия.

Получить больше информации

По вопросам IN-VITRO и для заказа саженцев — звоните или приезжайте .

В лаборатории

Изобретение относится к сельскому хозяйству и биотехнологии, а именно к способу выращивания растений in vitro. Способ состоит в том, что приготавливают питательную среду для укоренения, в качестве которой используют питательную среду по Мурасиге и Скугу, разбавленную вдвое по минеральным и органическим компонентам. В указанную среду добавляют оксибензойную кислоту в концентрации 110 -5 - l10 -4 M. Объем раствора доводят до 1 л, устанавливают pH 5,5 - 5,7 и при нагревании растворяют навеску агар-агара. Питательную среду разливают по сосудам и автоклавируют при давлении 1 атм (температура 120°С) в течение 15 - 20 мин, после чего осуществляют высадку на нее побегов. Через 30 дней культивирования на питательной среде укоренения пробирочные растения высаживают в нестерильные условия. При этом растения извлекают из сосудов и обрабатывают борной кислотой в концентрации 1,510 -4 - 1,510 -3 М. Способ позволяет увеличить приживаемость растений при пересадке в нестерильные условия на 13,3 - 49,0% по сравнению с известным способом адаптации. Технический результат достигается тем, что последовательно воздействуют оксибензойной кислотой на этапе укоренения побегов, а затем борной кислотой перед пересадкой растений в нестерильные условия. 2 табл.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и биотехнологии и может быть использовано в процессе укоренения и адаптации различных культур. Известен способ выращивания растений in vitro, при котором в питательную среду для укоренения с целью улучшения ризогенеза вводят регулятор роста ауксиновой природы, причем в качестве последнего чаще всего используют индолилмасляную кислоту /авт.св. СССР N 1792270, кл. A 01 H 4/00, 29.04.91. Пивень Н. М., Мельничук Г.Г., Фелалиев А.С. Способ укоренения побегов орехоплодных, полученных in vitro. Бюл. N 4 от 30.01.93/. Однако при таком способе на начальном этапе укоренения часто наблюдается усиление недифференцированного роста тканей, ингибирование процессов формирования и роста корней, что приводит к ухудшению укореняемости и удлинению периода укоренения растений. Поэтому для улучшения укореняемости применяют различные приемы, например, замачивают микрочеренки в растворе регулятора роста /ИМК/ над поверхностью агаризованной среды /патент РФ N2060646 кл. A 01 H 4/00, 1994 г. Туровская Н. И., Пронина И.Н., Матушкина О.В. Способ укоренения побегов плодовых культур, полученных in vitro. Бюл. N 15 от 27.05.96/. Вместе с тем данный способ весьма трудоемок, требует дополнительных затрат времени на приготовление среды и создает опасность контаминации среды вредной микрофлорой. Критическим этапом для растений, выращенных на питательных средах, является их адаптация к нестерильным условиям. При этом иногда погибает более 50% высаженных растений. Для улучшения приживаемости растения намачивают в воде /авт.св. СССР N 1720597, кл. A 01 H 5/00, 26.12.89. Упадышев М.Т., Высоцкий В. А. Способ подготовки растений - регенерантов к посадке в нестерильные условия. Бюл. N 11 от 23.03.92/. Однако намачивание в воде не на всех культурах приводит к положительным результатам. К тому же в условиях повышенной влажности воздуха и субстрата для адаптации создаются предпосылки поражения растений грибной инфекцией. Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является способ адаптации растений к нестерильным условиям, при котором растения с целью улучшения приживаемости обрабатывают 1%-ным раствором марганцевокислого калия, а затем раствором индолилуксусной кислоты /патент N 1792269 кл. A 01 H 4/00, 03.01.90. Дорошенко Н.Н., Кострикин И.А. Способ адаптации растений к нестерильным условиям. Бюл. N 4 от 30.01.93/. Недостатками этого способа являются многооперационность, трудоемкость, а также то, что он апробирован только на растениях винограда. Задачей, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, является увеличение укореняемости побегов, улучшение развития корневой системы различных растений, увеличение приживаемости пробирочных растений при пересадке в нестерильные условия, ускорение и упрощение процесса выращивания. Поставленная задача решается тем, что в способе выращивания растений in vitro, включающем приготовление питательной среды, высадку на нее побегов растений и их культивирование, на этапе укоренения растений в питательную среду дополнительно вводят оксибензойную кислоту в концентрации 110 -5 -110 -4 М. Кроме того, задача решается и тем, что на этапе пересадки в нестерильные условия растения обрабатывают антисептиком, в качестве которого используют борную кислоту в концентрации 1,510 -4 -1,510 -3 М. Сопоставительный анализ заявляемого технического решения с прототипом показывает, что заявляемый способ отличается от известного тем, что растения на этапе адаптации обрабатывают в качестве антисептика борной кислотой, причем предварительно растения культивируют на среде укоренения с добавлением оксибензойной кислоты. Это позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию "новизна". Предложенное техническое решение обладает изобретательским уровнем, так как предложенный способ выращивания совершенно неочевиден для специалистов, работающих в области культуры ткани, и ранее не был использован для этих целей, то есть предложен впервые. Применение предлагаемого способа позволяет получить новый эффект - увеличить укореняемость побегов, улучшить развитие корневой системы растений, повысить их приживаемость в нестерильных условиях. Химические препараты, необходимые для осуществления предложенного способа выращивания, характеризуются низкой стоимостью и производятся промышленностью, поэтому изобретение вполне может быть реализовано в условиях учреждений, работающих в области культуры тканей и органов растений. При этом не требуется разработки специального оборудования. Пример 1. Приготавливают питательную среду для укоренения. Для этого берут питательную среду по Мурасиге и Скугу /1962/, разбавленную вдвое по минеральным и органическим компонентам, мг/л: аммоний азотнокислый - 825, калий азотнокислый - 950, кальций хлористый - 220, магний сернокислый - 185, калий фосфорнокислый - 85, железо сернокислое - 13,6, этилендиаминотетраацетат натрия - 18,7, борная кислота - 3,1, марганец сернокислый - 11,2, цинк сернокислый - 4,3, калий йодистый - 0,42, натрий молибденовокислый - 0,13, медь сернокислая - 0,013, кобальт хлористый - 0,013, миоинозит - 50,0, тиамин, пиридоксин, никотиновая кислота - по 0,25, аскорбиновая кислота - 0,5, индолилмасляная кислота - 1,0, сахароза - 15000, агар - агар - 7000, остальное - вода до 1 л. В указанную среду добавляют оксибензойную кислоту в концентрации 110 -5 М. Объем раствора доводят до 1 л, устанавливают pH 5,5-5,7 и при нагревании растворяют навеску агар-агара. Питательную среду разливают по сосудам и автоклавируют при давлении 1 атм /температура 120 o C/ в течение 15 - 20 мин, после чего осуществляют высадку побегов. Как показали результаты /табл.1/, при разработанном способе отмечается увеличение укореняемости в зависимости от вида растения на 7 - 15%, числа корней в 1,2 - 2,8 раза, длины корней в 1,7 - 3,2 раза по сравнению с прототипом. Пример 2. Способ осуществляют по примеру 1. В питательную среду вводят оксибензойную кислоту в концентрации 5,010 -5 М>. Как видно из таблицы 1, применение разработанного способа выращивания позволяет увеличить укореняемость побегов в среднем на 20 - 27%, числа корней - в 2,1 - 2,9 раза, а их длины - в 1,8 - 5,6 раза по сравнению с известным способом. Пример 3. Способ осуществляют по примеру 1, в питательную среду вводят оксибензойную кислоту в концентрации 1,010 -4 М. Предложенный способ обеспечивает увеличение укореняемости побегов на 15 - 67%, числа корней - в 2,1 - 3,3 раза, длины корней - в 2,1 - 5,0 раз в сравнении с прототипом /табл. 1/. Следует отметить и такой положительный эффект выращивания растений по предложенному способу, как снижение диаметра каллуса в среднем в 1,6 раза по сравнению с известным способом. Это особенно важно для такой культуры, как груша, поскольку на среде с одной индолилмасляной кислотой она формирует в основании побега очень большой каллус, что отрицательно сказывается и на укоренении, и на развитии корневой системы. Более низкие концентрации оксибензойной кислоты /0,510 -5 М/ или более высокие концентрации /2,010 -4 М/ ухудшали развитие растений по сравнению с предложенным диапазоном концентраций, а следовательно, были менее эффективными /табл. 1/. Пример 4. Пробирочные растения через 30 дней культивирования на питательной среде укоренения высаживают в нестерильные условия. При этом растения извлекают из сосудов и обрабатывают борной кислотой в концентрации 1,510 -4 -1,510 -3 М. Приживаемость растений, обработанных борной кислотой, возрастает на 25,9-49,0% для груши, 14,3-35,7% для ежевики, 13,3-20,0% для малины черной, 16,7-40,0% для малино-ежевичного гибрида и на 10% для жимолости по сравнению с известным способом адаптации /табл. 2/. Часто наряду с увеличением приживаемости улучшается развитие корневой и надземной систем растений, увеличивается число листьев. Полученные результаты свидетельствуют о достижении значительного технического эффекта в сравнении с известным способом выращивания. Применение оксибензойной кислоты на этапе укоренения позволяет в среднем увеличить процент укоренения в 1,5 раза, число корней - в 2,3 раза, длину корней - в 3,3 раза. Благодаря более раннему укоренению растения становятся пригодными к высадке в нестерильные условия на 7 - 14 дней раньше, а следовательно, и ускоряется технологический цикл выращивания. Обработка растений борной кислотой на этапе адаптации к нестерильным условиям способствует увеличению приживаемости растений в среднем на 24% по сравнению с известным способом. В лучших вариантах число корней возрастало в 2 раза, их длина - в 5,6 раза, приживаемость в нестерильных условиях - в 4,4 раза. Выход готовых растений в среднем увеличивался в 1,9 раза по сравнению с известным способом выращивания.

Формула изобретения

Способ выращивания растений in vitro, включающий приготовление питательной среды, содержащей оксибензойную кислоту, высадку на нее побегов растений и их культивирование для укоренения с последующей пересадкой растений в нестерильные условия, отличающийся тем, что перед пересадкой в нестерильные условия их обрабатывают борной кислотой в концентрации 1,5 10 -4 - 1,5 10 -3 М.

Использование: сельское хозяйство и биотехнология. Сущность изобретения: питательная среда содержит минеральные соли и регуляторы роста, при этом в агаризованную питательную среду вводят дополнительно тетраметилтиурамсульфид (ТМТД) в количестве 25-100 мг/л или 25-100 мг/л ТМТД и 1-20 мг/л фундазола, или 25-100 мг/л ТМТД и 1-20 мг/л фундазола в сочетании с 2,5-50 мг/л метиленового синего и 1-10 мг/л бриллиантового зеленого, а в питательную среду с твердым носителем вводят дополнительно 20-100 мг/л ТМТД или 25-100 мг/л нистатина. 2 табл.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и биотехнологии, в частности к способам микроклонального размножения растений и безвирусному семеноводству. Известен способ микроклонального размножения и выращивания растений in vitro путем посадки микрочеренков на питательную среду, содержащую элементы минерального питания по Мурасиге-Скугу и регуляторы роста. Недостатком указанного способа является частое "зарастание" питательной среды микроорганизмами-контаминантами при нарушении условий стерильности. Размножение микроорганизмов приводит к накоплению токсических веществ и вследствие этого гибели части растений и, следовательно, возрастанию затрат для получения необходимого их количества, и(или) для поддержания более высокого уровня стерильности. Цель изобретения - подавление роста микроорганизмов-контаминантов, упрощение способа и снижение затрат при выращивании растений in vitro. Предлагаемый способ выращивания растений in vitro заключается в следующем. Посадка микрочеренков в стерильных условиях производится на питательную среду, содержащую минеральные соли, сахарозу, агар-агар и регуляторы роста, в состав которой дополнительно вводят 25-100 мг/л тетраметилтиурамдисульфида (ТМТД) или ТМТД (25-100 мг/л) и фундазол в количестве 1-20 мг/л или ТМТД(25-100 мг/л) и фундазол (1-20 мг/л) в сочетании с метиленовым синим 2,5-50 мг/л и бриллиантовым зеленым - 1- 10 мг/л. Предлагаемый способ отличается от известного способа выращивания in vitro тем, что в состав питательной среды дополнительно вводят соединения, обладающие биоцидной активностью против наиболее часто встречающихся в практике микроразмножения растений видов микроорганизмов грибной и бактериальной природы: ТМТД или ТМТД в сочетании с фундазолом или ТМТД в сочетании с фундазолом, метиленовым синим и бриллиантовым зеленым. В результате применения данного способа гибель растений вследствие "зарастания" питательной среды микроорганизмами-контаминантами снижается в 2 и более раз. Соответственно снижаются затраты, необходимые для выращивания дополнительного числа растений. При поддержании коллекций сортов и форм in vitro иногда возникает ситуация "зарастания" всех пробирок данного сорта с угрозой его потери. В случае контаминации чувствительными микроорганизмами черенкование инфицированных растений на предложенную среду позволяет сохранить коллекционный образец. Посадка микрочеренков в стерильных или нестерильных условиях производится на стерилизованный прокаливанием перлитовый песок, пропитанный жидкой минеральной питательной средой без органических добавок, в состав которой дополнительно вводят 20-100 мг/л тетраметилтиурамдисульфида (ТМТД) или 25-100 мг/л нистатина. Применение компонентов с альгицидной активностью - ТМТД или нистатина - устраняет зарастание микроводорослями, выделяющими токсичные для растений соединения, при выращивании в нестерильных условиях или при случайном нарушении стерильности. Это позволяет также последнее микрочеренкование перед высадкой в теплицу проводить в нестерильных условиях, что позволяет упростить способ выращивания за счет более удобных манипуляций с черенками в нестерильных условиях и уменьшить необходимые площади по сравнению с пробирочной культурой. Пример 1. Биоцидные компоненты в указанных табл. 1 и 2 концентрациях были добавлены к питательной среде для микрочеренкования, содержащей минеральные соли по Мурасиге-Скугу и регуляторы роста, а также 7 г/л агар-агара и 20 г/л сахарозы, перед ее стерилизацией автоклавированием (120 o C, 20 мин). Черенки растений картофеля, поддерживавшихся in vitro в стерильной культуре, с одним-двумя междоузлиями высаживали в пробирки с питательной средой и выращивали 3-4 нед при температуре 20 o C и освещенности 5000 лк. Учитывали число случайных зарастаний грибной и бактериальной инфекцией. Как видно из табл. 1, суммарное зарастание контаминантами грибной природы снижается в два и более раз при введении в состав среды ТМТД и фундазола. При этом зарастание Penicillium sp. подавляется полностью (в контроле 1.3%), а рост бактерий изменяется незначительно (табл. 2). Введение в состав среды метиленового синего и бриллиантового зеленого является эффективным в качестве антибактериального средства (табл. 2). Пример 2. Черенки растений картофеля, поддерживавшихся in vitro в стерильной культуре, с одним-двумя междоузлиями нестерильно высаживали на перлитовый субстрат, стерилизованный прокаливанием 2 ч при 170 o C и помещенный в чашки Петри, пропитанный питательной средой, содержащей раствор Кноппа или минеральные соли по Мурасиге-Скугу с добавлением регуляторов роста, а также биоцидных компонентов: 25 мг/л ТМТД или 25 мг/л нистатина. По мере подсыхания субстрата проводили полив дистиллированной водой (примерно, 1 раз в неделю). Через две недели в контрольном варианте (без добавления ТМТД или нистатина) отмечено зарастание микроводорослями, в вариантах с добавлением ТМТД и нистатина зарастание отсутствует, вес надземной части растения составляет 100-180% от контроля. Через 1 мес после посадки в контрольном варианте отмечено бурное развитие микроводорослей на поверхности перлита, растения угнетены, отдельные растения погибли, в опытных вариантах небольшой рост водорослей в местах полива, развитие растений нормальное.

Формула изобретения

Способ выращивания растений in vitro, включающий микрочеренкование и посадку микрочеренков на питательную среду, содержащую минеральные соли и регуляторы роста, отличающийся тем, что посадку микрочеренков осуществляют на агаризованную питательную среду с сахарозой или на питательную среду с твердым носителем, в качестве которого используют перлит, при этом в агаризованную питательную среду вводят дополнительно ТМТД в количестве 25 100 мг/л, или 25 100 мг/л ТМТД и 1 20 мг/л фундазола, или 25 100 мг/л ТМТД и 1 20 мг/л фундазола в сочетании с 2,5 50,0 мг/л метиленового синего и 1 10 мг/л бриллиантового зеленого, а в питательную среду с твердым носителем вводят дополнительно 20 100 мг/л ТМТД или 25 100 мг/л нистатина.

Похожие патенты:

Изобретение относится к гибридомной технологии и может быть использовано при диагностике гепатита В

Изобретение относится к области ветеринарной биотехнологии, в частности, к получению штамма гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела, которые могут быть использованы для приготовления высокоспецифических диагностических реагентов с целью идентификации и количественного определения уровня иммуноглобулинов G класса в биологических жидкостях организма свиньи